Chapitre 10 p12/29 Expérience de Riezman et Nelson

Voila je pige pas trop cette expérience.

Je comprend qu'on a deux mutation, une qui touche la pompe à proton et l'autre qui touche la voie d'endocytose et je comprend pourquoi c'est létal si on a un double mutant end3 vma2.

Puis on prend un mutant vma2 ura3 qu'on complémente avec un plasmide VMA2 URA3, et la souche peut perdre ce plasmide en milieu acide.

A partir de ce point la je comprend pas ce qu'on fait après pour mettre en évidence les gènes d'endocytose....

Help me

Je suis pas sûr de comprendre cette expérience non plus.
En gros, on mute pleins de levure jusqu'à avoir notre mutant vma2.
Ces mutants là, on les mute également pour ura3 (double mutant vma2.ura3)

Ensuite on cherche une nouvelle mutation qui ferait que ces mutants ne seraient plus viable. Donc on refait de la mutagenèse sur nos levures et on leur introduit un plasmide VMA2-URA3 qui peut être perdu en milieu acide sauf si notre mutagenèse a fait que ces levures sont doubles mutants vma2-end3 (en fait triple mutant vu qu'elles sont aussi ura3 ???)

Là déjà je suis pas sûr d'être dans le bon...

Enfin pour savoir si notre levure a perdu son plasmide on utilise des milieux avec acide fluorochlorotrique (FOA) qui peut être transformé par URA3 en produit toxique qui tue la levure. On fait donc pousser nos levures sur un milieu riche en uracile puis réplication sur milieu sans uracile. Les levures qui n'auraient pas poussées sur le milieu sans uracile mais bien sur milieu + uracile possèderaient encore leur plasmide et seraient donc double mutant end3-vma2.

Je comprends pas du tout là, si elles possèdent le plasmide ça signifie qu'elles possèdent le gène URA3 et qu'elles peuvent donc transformer le FOA en produit toxique sur les 2 milieux non? A moins que quand il y a de l'uracile, l'URA3 est trop occupé à métaboliser l'uracile que pour transformer le FOA.

Fin bref, est ce qu'une bonne âme peut m'éclairer là dessus?

D'après ce que je pense avoir compris, on a des levures mutantes ura3 vma2, et on leur donne un plasmide URA3 VMA2 qui est perdu en milieu acide (je vois pas trop pourquoi mais apparemment c'est comme ça ^^).
On les croise avec des autres mutants, et on veut isoler les doubles mutants vma2 end3. On les met alors sur milieu acide, les levures vont perdre leur plasmide sauf les vma2-end3 car celles-là meurent si elles n'ont plus ce plasmide (létalité synthétique). Donc en gros, nos doubles mutants sont les seules levures qui conservent le plasmide en milieu acide donc on les reconnait comme ça.

Ah oki ça serait plutôt par croisement pour obtenir nos doubles mutant vma2-end3.
mercii

Je pige pas à quoi sert le gène ura3...

Si on a un mutant vma2 dans lequel on met un plasmide qui complémente sa mutation => la levure est viable. Si on la croise avec une end3 (qui elle aussi est viable), le double mutant obtenu est viable tant que le plasmide reste dans la cellule... Si le plasmide se barre elle meurt...

Pourquoi on utilise un nouveau gène à la rien à voir?? il code pour quoi cet URA3?

( j'ai un peu du mal ce soir...)


EDIT: je sais toujours pas à quoi il sert cet ura3 quelqu'un se dévoue pour m'expliquer... et aussi à quoi sert cette méiose qui est indiquée sur le slide...??