Gel retard

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Gel retard

Message par sebastien le Mar 17 Jan - 22:44

Comment on fait pour mettre en évidence l'interaction entre protéine et ARN?

On doit connaître l'ARN que l'on suspecte être en interaction? (pour moi oui...)

On fait migrer notre ARN sur un gel d'électrophorèse et on met une sonde hybride radioactivement marquée qui permet de mettre notre brin en évidence. Si il a moins migrer que notre ARN (donc que l'on connait et dont on connait la taille) c'est qu'il est accrocher à une protéine?? c'est ça?

Sleep Sleep Sleep Sleep

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Re: Gel retard

Message par Pretoriko le Mar 17 Jan - 22:48

Ouais en gros c'est ça.

J'avais commencé à faire un petit notepad avec différentes techniques dont on pourrait parler si on tombe la dessus :

-Retard sur gel :
°Incubation d'une séquence de nt marqué avec extrait nuclaire/cytoplasmique.
°Dépot sur Gel (Northerblot/SoutherBlot).
°Migration et visualisation.

-Variante retard sur gel : COUPLAGE AUX UV
°Incubation sonde ARN radioactive avec extrait de protéine dont on suspecte y avoir un facteur de liaison
°Soumet aux UV
°Si a.a. aromatique dans zones d'intéraction il va y avoir un pontage.
°Traitement RNase
°Migration en condition dénaturante --> Donne une idée approximative du PM de la protéine

-CHIP
°Récolte protéine par immunoprécipitation.
°Décrochage d'un éventuel acide nucléique par ultrason.
°Mesure au spectrophotomètre.

-Chromatographie d'affinité
°Colonne présentant séquence dont on veut savoir quelles protéines s'y fixent.
°Elution avec extrait nucléaire/cytoplasmique.
°Récupération des protéines fixées par compétition ou traitement salin.
°Diverses chromatographiques pour séparer les protéines selon taille, point isoélectrique, capacité à lier la mlc, charge...)

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Re: Gel retard

Message par sebastien le Mar 17 Jan - 22:54

clââssee!! je crois que je commence à me demander si tu ne te drogue pas ou si tu n'es pas fou, ... J'ai jamais vu un mec aussi motivé !!

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Re: Gel retard

Message par Pretoriko le Mar 17 Jan - 23:01

lool mais il faut rester motiver voyons Razz

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Re: Gel retard

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