vecteurs plasmidique x-gal et coloration

Aller en bas

vecteurs plasmidique x-gal et coloration

Message par Fred 2703 le Jeu 13 Déc - 14:08

Pour vérifier si un plasmide contient bien l'adn étranger, on utilise un deuxième marqueur : enzyme galactosidase (gène lacZ).
On place le tout sur un substrat x-gal. Si le gène de l'enzyme est exprimé, on obtient une coloration bleu pour la colonie.
J'ai écrit qu'on insérait l'adn étranger dans la zone polylinker du gène lacZ et que si la colonie était blanche (donc non expression du gène lacZ), c'est que l'adn étranger c'était inséré dedans et qu'on avait donc notre recombinant. est ce que c'est correct ?

je viens d'arriver sur la partie avec le système d'expression eucaryote des insectes et j'ai l'impression qu'on dit le contraire. Quelqu'un peut m'éclairer sur cette partie ?
avatar
Fred 2703
Mitochondrie
Mitochondrie

Masculin
Nombre de messages : 33
Année d'étude : MA1
Section : Bioingénieur
Option : Agronomie - Option tropical
Date d'inscription : 01/11/2010

Revenir en haut Aller en bas

Re: vecteurs plasmidique x-gal et coloration

Message par Annabelle le Dim 23 Déc - 12:37

On sait que la galactosidase va cliver le x-gal (incolore) en x (coloré) et galactose (incolore).
Si la portion d'ADN étranger est bien insérée, la galactosidase ne sera pas active --> le x-gal ne sera pas clivé en x et galactose.

DONC
> Si on voit des colonies avec une colo bleue, c'est que galactosidase est active --> que l'ADN étranger n’a pas été inséré.
> Si on observe des colonies avec une colo blanche, c'est que la galactosidase n'est pas active --> que la portion d'ADN étrangere a bien été insérée.

donc j'ai la même chose que toi Surprised
par contre je ne suis pas encore arrivée aux insectes Razz
avatar
Annabelle
Virus
Virus

Féminin
Nombre de messages : 744
Année d'étude : MA2
Section : Bioingénieur
Option : Environnement
Date d'inscription : 15/09/2008

Revenir en haut Aller en bas

Re: vecteurs plasmidique x-gal et coloration

Message par ben le Dim 23 Déc - 15:30

Pour les insectes, si j'ai bien compris :

Tu as un premier plasmide dans lequel tu met ton gène d'intérêt, et un morceau du gène lacZ (il n'est pas en entier).
Tu as un deuxième plasmique, qui contient l'autre partie du gène lacZ.
Tu fou tout dans ta cellule d'insecte (--> co-transfection) et dans cette cellule, tu vas avoir recombinaison entre les deux plasmiques.

Si tu as une recombinaison, les deux fragments des lacZ se retrouvent ensemble, et donc la B-galactosidase est exprimée, et donc le X-Gal est clivé, donnant la couleur bleue à la plage.
Si pas de recombinaison, les deux parties de lacZ sont séparées, et ne peuvent donc pas produire une enzyme correcte. Ca reste donc blanc.
avatar
ben
Neurotransmetteur
Neurotransmetteur

Masculin
Nombre de messages : 216
Année d'étude : BA2
Section : Bioingénieur
Date d'inscription : 22/04/2010

Revenir en haut Aller en bas

Re: vecteurs plasmidique x-gal et coloration

Message par Contenu sponsorisé


Contenu sponsorisé


Revenir en haut Aller en bas

Revenir en haut

- Sujets similaires

 
Permission de ce forum:
Vous ne pouvez pas répondre aux sujets dans ce forum