Méthode de séquencage de Sanger

Si quelqu'un serait cap de me l'expliquer d'une maniere plus facile que dans le resumé se cerait trop trop bien parceque j'y ai rien compris :s MERCIIII

Sur Wikipédia c'est bien expliqué ... Méthode de Sanger

Sinon ce qu'il faut retenir c'est qu'on fait quatre séquençages en parallèle, un pour chaque nucléotide.
Dans chacun des séquençages on incorpore le gène à séquencer, un petit fragment d'ARN complémentaire du début du fragment à répliquer, il servira d'amorce à l'ADN polymérase. On incorpore aussi des déoxy nucléotides tri-phosphates (dNTP) qui serviront de briques de construction à l'ADN polymérase. Enfin on ajoute un peu de di-déoxy nucléotides (ddNTP) qui correspondent au dNTP (Par exemple on met dans le même tube des dATP et des ddATP). Comme ils n'ont plus de OH sur le 3', ils vont bloquer la réplication.

Ensuite on laisse travailler l'enzyme dans chaque tube, on obtiendra des fragments qui pour chaque tube s'arrêteront au nucléotide correpondant au ddNTP incorporé (ex : ddATP ==> L'ADN Pol s'arrête à chaque A). Comme la terminaison se fait de manière statistique suivant que l'ADN polymérase utilise un dNTP ou un ddNTP, il en résulte un mélange de fragments d’ADN de tailles croissantes, qui se terminent tous au niveau d'un même nucléotide dans la séquence.

Ensuite on fait électrophorèse des fragments récupérés, avec des tailles différentes. Quand on met en parallèle les 4 électrophorèses (une pour chaque nucléotide), comme chaque brin obtenu s'arrête tjs au même nucléotide, on peut retrouver la séquence. Mais attention on obtient la séquence complémentaire du brin qu'on veut séquencer.

Voilà j'espère que ça t'a aidé à plus pendant le blocus