Système Gateway de Vanhamme

Koukou, dites, est-ce que quelqu'un comprend le système Gateway, parce que je bloque dessus et ça m'énerve.
Merci, courage à tous, plus que 16h

Dapres ce ke jai compris:
C'est un Système alternatif aux enzymes de restriction : éviter l’utilisation d’enzymes de restriction et de ligase.
Cette méthode permet la recombinaison directionnelle d’un fragment ADN produit par PCR dans un plasmide.
Le transfert de fragment d’ADN entre différents vecteurs est ainsi grandement facilité.

Oui, ok, merci.
Et les schémas, tu les comprends? Pcq il est passé hyper vite dessus et j'ai rien compris

non pas vraiment
je crois que les schémas montrent les sites de recombinaisons homologues P, B, R,L etc et montrent le fait qu'une séquence d'ADN peut être passée vite fait d'un vecteur á l'autre..

Moi je comprends pas trop son slide, mais voila ce que j'ai noté:

Plutot que d'utiliser des enzymes de restriction, on utilise plutot des SI (séquences d'insertion) reconnue par des transposases (principe des transposons)

Donc commercialement, ça revient à vendre des plasmides "vierges", contenant tout ce qu'il faut (gène de sélection, gène rapporteur, ori ...) mais à la place d'un MCS, on a plutôt une petite portion bordée de 2 SI.
On vend également des amorces pour notre gène d'interêt, bordée de SI. Donc en gros avec ces amorces on fait une PCR pour avoir plein d'exemplaires de notre gène d'interêt bordé des SI.

En mélangeant nos exemplaires (bordés de SI) avec les plasmides fournis, et en ajoutant un peu de transposase (enzyme transposition), ben nos gènes d'interêt vont gentillement s'insérer entre les deux SI des plasmides.

Après on insère le plasmide dans l'organisme producteur/cloneur.

Mais comment savoir quelles bactéries ont intégré les plasmides qui avaient eux même intégré le gène d'interêt ??

Sélection via systeme poison/antidote!

Sur les plasmides a la base ya un gène qui code pour une toxine. Sur la séquence avec le gène d'interet, ya la séquence qui code pour l'antidote.

Bref, seules les bactéries qui auront intégré le plasmide ayant intégré la séquence par transposition survivront :
- à l'antibiotique du milieu de culture (gène resistance sur plasmide)
- à la toxine qu'elle synthétise elles-mêmes grace a l'antidote qu'elles synthétise aussi si elles ont le bon plasmide.

En plus ça permet de conserver les bactéries qui auront encore le plasmide après division. Si après division elles ont perdu le plasmide, ben l'antidote se dégradant beaucoup plus vite que le poison, elles meurent.

Voila voila c'est un peu long mais j'ai fait au mieux =)

Cool, merci à vous deux, j'ai compris et ça confirme les bribes que j'avais écrites. C'est cool. Bon, par contre, j'ai été vérifier sur internet et là, pour le système Gateway, ils parlent à aucun moment d'un système avec transposases, mais bon, j'ai noté ça aussi. Autant étudier ce que le prof dis.

clair ça me semble bizarre aussi...

sinon le seul lien entre son slide et mes notes c'est que ccBD c'est une des composants du systeme toxine/antidote -_-

j'ai pas l'empression qu'il parle de ça dans les slides de l'année passée, ça me faitr un peu flipper.

mais en tout cas merci thom, ton ptit résumé est super

moi j'ai noté ca comme deux systèmes alternatifs différents aux enzymes de restricction
on utilise soit le syst gateway soit transposase, mais j'ai pas compris gateway mais en tout cas c'est rien à voir avec tsposase...