Partie Souogpi: UV-crosslinking

Si qqn a des infos à ce propos...
Qu'est-ce qu'on mesure? (protéine de liaison à l'ARN??)
J'ai juste noté que la sonde radioactive devait se trouver sur le phosphore alpha d'une molecule d'NTP...

Le slide m'est assez obscure!

Merci!

Coucou tout le monde moi aussi j'ai des questions sur la partie biotech animale
est-ce que qqu'un pourrait m'expliquer la préhybridation (quesque c'est? on prehybride avec quoi ? pq?) et l'élimination des radicaux (quesque c'est? cmt?) pour l'hybridation in-situ ?
et sinon faut connaitre toutes les formules sur la Q-PCR et la PCR "normale" ? Parce que c'est un peu charabia tout ça ...
cmt ça marche le TAP-Taq et la technique du double hybride ?
merci

pour l'uv crosslinking : ça permet d'étudier les interactions directes entre proteines et arn cible. Un passage sous UV fait que la protéine se lie de façon covalente à l'arn marqué (radioactif). Ensuite il faut un traitement RNAse pour ne garder que la protéine (qui sera marquée aussi puique lien covalent) et la révéler

De mémoire, la technique du double hybride c'est un test d'interaction entre deux protéines.

On a à notre disposition :

-1 gène
-2 facteurs de transcription qui lorsqu'ils interagissent provoquent la transcription du dit gène. On va nommer ces deux facteurs FT1 et FT2

Ce qu'on veut faire c'est tester l'interaction entre deux protéines PROT1 et PROT2.

Pour ce faire, on va fabriquer deux doubles hybrides comprenant la partie du facteur de transcription qui se lie à l'ADN et une des deux protéines à lier :
- FT1-PROT1 (hybride 1)
- FT2-PROT2 (hybride 2)

Les deux facteurs de transcription vont comme d'habitude se lier à l'ADN, et le reste dépendra des deux protéines interagissant avec les facteurs de transcription. Si il y a transcription, ca veut dire que PROT1 et PROT2 interagissent bien ensemble, sinon, il n'y a pas d'interaction entre ces deux protéines.

On peut ainsi voir un large panel de qui interagit avec qui, et avec des expériences un peu plus évoluées et à grande échelle, construire l'interactome des protéines.

Voilà

PS : si j'ai fait une faute hésitez pas à corriger!

Perso, c'est la méthode TAP-TAQ que je pige po du tout!