petite question

bonjour!

Alors un petit détail qui me turlupine. Quand on fait une analyse des microorganismes avec la PCR, on utilise un inhibiteur (PMA) pour éviter que les microorganismes morts ne soient pris en compte dans la PCR.

Mon problème c'est que pour la PCR, on doit détruire toutes les bactéries, on lyse le tout donc au final, si on met un inhibiteur, tous les acides nucléiques seront en contact avec l'inhibiteur et la PCR par en couille...

Ou est mon incompréhension?

Un grand merci et bon courage

Nico

S'il faut croire son slide, il apparait que le PMA n'entre que dans les cellules non-intègres et dégomme l'ADN. Par contre pour les cellules entières, le PMA n'a pas accès à l'ADN et donc il peut être PCRisé normalement.

ok ca me va comme explication!

QUELQU'UN A PAS EU ASSEZ DE TEMPS POUR BOSSER ET VEUT PASSER à 17H30????????

je prends n'importe quelle heure

Si tu mets le pma avant de lyser tes cellules tu aura pu fixer le pma a toutes les cellules non vivantes au départ non?

oui je suppose que c'est ca!

par contre dans la mesure de la quantité de E coli, on a comme substrat du X-glu. On mesure la fluorescence et fonction du temps.

Le lien entre fluo et molécules de X-glu c'est quoi encore?? (c'est dans les tp mais je retrouve pas ces fichiers...)

bin je pense que les enzymes nique le X-Glu (hydraulyse) et c'est alors fluo! donc le lien c'est que plus ya de bact, plus y a d'enzymes pour niker X-glu et donc plus il y a de fluorescence!

et tant qu'on y est. tu sais pourquoi le nombre de bactéries diminue avec le temps de séjour dans les boues activées??

parce qu'elles se font brouter!