PCR / Clonage d'ADN

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PCR / Clonage d'ADN

Message par Hecq... le Ven 21 Jan - 23:46

Pourquoi cloner de l'ADN via plasmides alors que la technique PCR existe ? Neutral

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Re: PCR / Clonage d'ADN

Message par FireHead55555 le Sam 22 Jan - 16:33

j'ai lu que la PCR c'était c'était pour des fragment plus cours et l'autre on peut le faire pour des génome entier. Mais je suis pas sur j'ai pas vraiment fait le travail xD

edit :

J'ai trouver une vrai meilleure raison même si celle que j'ai dit me semble valable aussi --> Pour la PCR on doit connaître la séquence que l'ont code car on travaille avec des amorces qui doivent se fixer sur la séquence a multiplier. Donc pour multiplier un gêne par exemple dont on ne connait pas la séquence, on peut utiliser uniquement le clonage moléculaire.
Je pense en plus que c'est le genre de question qu'il va demander ^^

On peut aussi ajouter que le clonage moléculaire permet aussi directement l'expression de la séquence ajoutée donc la synthèse en masse de la protéine produite par la séquence reproduite.

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Re: PCR / Clonage d'ADN

Message par Hecq... le Sam 22 Jan - 18:06

Bon on m'a dit que c'est une question qui est tombée dans un exam de MA1 pour un autre cours et j'y ai encore réfléchi un peu.

Avantages PCR :

Facilité, rapidité, cout, possibilité de coupler avec une reverse transcriptase pour travailler avec des ARN, possibilité de connaitre en temps réel la quantité de copies réalisées, possibilité de travail à partir d'échantillons de tailles très faibles.

Désavantages PCR :

Contaminations de l'échantillon peut induire de grosses erreurs au final, nécessité de connaitre au moins en partie une séquence de l'échantillon pour pouvoir l'amorcer correctement, la taille de la séquence à multiplier possible est bornée supérieurement (atteinte du plateau), nécessité de correctement programmer le thermorégulateur au départ (ce qui demande un certain niveau de connaissances de l'échantillon).

Avantages clonage :

Fonctionne en cas d'échantillon complètement inconnu, le résultat peut-être de taille potentiellement infinie, fonctionne mieux en cas de connaissance de l'échantillon (choix des enzymes de restriction peut-être orienté), adaptabilité presque totale.

Désavantages clonage :

Technique lourde, lente, chiante, demandant un post traitement après clonage (électrophorèse), demande un échantillon de taille conséquente au départ, technique demandant un plus haut niveau de connaissances (du à la grande adaptabilité potentielle : choix du plasmide, des enzymes de restriction, des ligases, de la bactérie utilisée...).

Je peux m'être trompé qq part. Very Happy


Dernière édition par Hecq... le Sam 22 Jan - 23:42, édité 4 fois

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Re: PCR / Clonage d'ADN

Message par FireHead55555 le Sam 22 Jan - 18:17

Nice

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Re: PCR / Clonage d'ADN

Message par omy le Sam 22 Jan - 19:47

Je dirais aussi que lors des PCR les amorces utilisé depasse souvent de l'extremité 3 prime du brin modele et que ces rallonges correspondent a des zones reconnus par des enzyme de restrictions.Sa permet ensuite en coupant un plasmide avec L'enzyme reconnaissant la rallonge de lier le produit de PCR dans un plasmide et creer ainsi des banques de génes.. Donc en faite on couple souvent les 2 technique de clonage.

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Re: PCR / Clonage d'ADN

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