Gel d'agarose

coucou
comment vous avez fais les gels????

tu prends 100 ml d'eau distillée avec 1,5 g (ou autre) d'agarose que t'as pesé préalablement, tu mélanges le tout.
Après tu chauffes jusqu'à ébullition dans un four à micro onde.

Après tu mets une ou deux gouttes de révélateur (c'est pas ça le vrai nom mais j'me souviens plus) qui vas se lier à l'ADN pour le révéler sous les uv. Attention ce produit se lie aussi a notre ADN (mains par ex donc gants) donc c'est cancerigène! c'est le bromure d'éthidium normalement mais dans notre cas on a mis autre chose qui n'est théoriquement pas cancerigène (pas sûr).

Tu mets ce mélange sur les plaques en essayant de ne pas faire de bulles (si il y en a, tu les retires avec une petite pique), sinon ton électrophorèse va foiré, et puis tu laisses durcir et c'est près à être utilisé...

Attention encore, on a placer des petites brosses (genre de peigne) pour pouvoir incorporer ensuite nos échantillons à l'intérieur (avec la pipette = petit trou) avant que le mélange ne soit dur évidemment

ca va comme explication?

Ciao ciao

C'est parfait comme explication
Si quelqu'un a juste noté la nom de ce qui remplace le bromure d'éthidium?

Je l'ai oublié, j'avais fait une partie des gel en plus, j'ai entendu le mot au moins 5 fois mais je ne l'ai jamais noté ><

edit : du bleu de méthylène c'est possible ?

Salut ! Pour le truc colorant j'ai noté du bleu de bromophénol mais en allant sur internet je ne lui ai pas trouvé de propriétés qui font qu'il pourrait se lier à l'ADN. Le seul truc qui est mis c'est qu'il a une charge négative et donc qu'il migre aussi, mais pas en même temps que l'ADN (il migre à la vitesse où migrerait un brin de 500 bp). Si quelqu'un a d'autres précisions ça serait sympa

sur wiki ils parlent de tampon pour le gel, est ce qu'on en a utilisé dans ce cas ci ?

aucune idée pour le marqueur par contre...

Je n'en ai pas mis en tout cas, peut être les assistants dans mon dos mais ca m'étonnerais très fort, j'ai quasi pas quitté le flacon des yeux du moment ou je l'ai rempli d'eau jusqu'au moment ou je l'ai coulé dans la machine.

oki merci