Biotech animale - sécrétion périplasmique (E. Coli)

Coucou!

Dans le chapitre sur les protéines recombinantes, en biotech animales, il parle de façon rapide et inexpliquée (tiens donc) de sécrétion périplasmique, avantages et inconvénient. Mais ce que je ne comprends pas, c'est pourquoi il parle de ça, est-ce qu'on veut induire une séquence signal dans la protéine recombinante afin qu'elle se retrouve dans le périplasme et qu'on puisse la récupérer plus facilement ? (en + du fait qu'elle puisse de conformer et avoir des ponts S-S) ? Si oui, comment on fait ?

Merciii

En fait j'ai du mal à cibler ce qu'il veut dire dans la quinzaine de slides de ce chapitre du 55 au 70 environ... si quelqu'un y voit plus clair, je suis preneuse d'une explication ! merci beaucoup

Oui c'est sa helene.

Comment on fais :

On a notre plasmide d 'expression qui contient tous le nécessaire. En plus a l'amont de l'orf de la proteine que tu veut produire et en aval de son promoteur tu rajoute la séquence signal qu'il faut pour que la proteine soit transporté dans le periplasme. Apres comment faire sa c'est pas tres compliquer mais je pense pas que c'est tres importants. Je pense que c'est comme sa :
Il suffit par exemple de faire PCR de ton orf d'interet avec au niveau des amorces des extrémités flaquantes qui correspondent aux extrémités que tu aurait si tu couper n importequel fragment d'adn avec une enzyme de restriction donné. Tu fais PCR pour ta sequence signal egalement que tu va prendre d'un organisme donné. Pour cette PCR les amorces vont également avoir les meme extrémités flaquantes.=>tu mes tes 2 produits de pcr ensemble avec les ligases => tu a réaliser ton fragment avec la sequence signal que tu doit introduire dans ton plasmide au niveau du Multicloningsite(en coupant ton plasmide avec la meme enzyme de restriction).
a oui et tu prie pour que la ligations ce fais dans le bon sens :p. non je pense que si tu utilise pendant ta PCR deux extrémités flaquantes que tu aurait obtenus par clivage d un fragment avec 2 enzyme de restriction differentes alors la ligations ne peut se faire que dans le bon sens. Alors, tu clive bien sur ton plasmide a l'aide de ces deux enzymes de restrictions. Mais c'est du details.

Je sais pas si ca va être utile se que je vais dire mais un des avantage du fait que c'est périplasmique c'est que la méthode de purification peu être plus douce et ne détruire que la parois de la bact. De ce fait ta prot d'intérêt n'est pas mélangée a toutes les prots du cytoplasme mais elle est seulement mélangée au prot périplasmique (qui sont moins nombreuses). Ceci explique qu'elle est plus facile à purifier par la suite.
NB: après migration vers le périplasme la séquence de signal est directement clivée et donc ta prot n'est absolument pas modifiée.

Voila, en espérant avoir été utile