Technique de l'étiquette TAP

On utilise cette technique pour étudier l'interaction entre protéines. Mais je ne comprend pas pourquoi on fait deux élutions sur colonnes? Pour moi une seule aurait suffit,non?

Pour situer ma question, on en parle à la fin du deuxième chapitre dans le cours de Vanhamme

C'est une double purification. Quand tu fais une élution, c'est rare que t'obtiennes une purification à 100%, il pourrait il y avoir d'autres trucs qui se fixent sur l'Ig lors de la première chromato.
Et puis c'est p-e aussi une façon, lors de la deuxieme chromato, de séparer la protéase qui a clivé l'étiquette.
Mais bon j'avoue on aurait évité ça si on l'avait fait avec une seule purification avec une autre étiquette que TAP.

D'après wikipedia (bon j'avoue pas la meilleure référence), ben c'est une des méthodes des plus simples et des plus efficaces pour étudier les interactions d'une protéine dont on ne sait rien.
Comme on ne sait rien de la protéine, il faut absolument que il n'y ait pas de contamination dans l'échantillon étudié, sinon on peut pas savoir quelles sont les protéines qui interagissent vraiment parmi les plusieurs qu'on obtiendrait si il y avait contamination. Donc on veut uniquement la protéine et éventuellement la ou les autres protéines avec lequelles il y a interaction invivo.
Bref, c'est une façon facile et sure d'étudier les interactions qu'a une protéine in vivo, même avec aucune idée des complexes d'interaction qui pourraient se former.

mmm j'capte pas trop cette obscure technique... qq un est pas cho de l'expliquer un tit coup se serait cool! en vous rmerciant!

ok j'ai capter l'histoire de la TAP (2site de fixation (IG et colmoduline) qui nous permettent de purifier la protéine par chromato d'affinité --> colone 1 avec IG puis colonne 2 ac colmoduline) mais je captre pas ce que ca nous donne comme info sur les interaction de la protéine d'intéret avec d'autres protéines... on fait deux chromato sur colonne, qui nous permettent de bien purifier la protéine d'interet, mais quand est il des intéracions avec d'autres protéines????

comme tu purifie ta protéine d'interêt, tu isole en même temps toutes les protéines qui interagissent avec elle. Il suffit donc de récupérer ton extrait purifié et de faire une analyse par western blot par exemple et de déterminer les protéines