Transgénèse avec Agrobactérium

Salut les jeunes

Petite question sur la fabrication d'une plante transgénique par Agrobactérium. A première vue, de nos jours, on est capable de retirer tout l'ADN-T d'agrobactérium pour le remplacer par notre gène d'intérêt. Le problème c'est que cette ADN-T contient non seulement les gènes producteurs d'opines (mais bon ceux là ils peuvent être retirer, on en a pas besoin), mais surtout les oncogènes, qui vont permettre une grosse production d'auxine et de cytokinine par la plante permettant ainsi d'avoir notre tumeur souhaitée. Est ce que par hasard elle aurait dit quelque chose là dessus?

Merci d'avance

Euh je ne sais pas, je n'étais pas là
mais à mon avis, on n'a plus besoin des gènes de production des hormones, vu que pour avoir un cal il suffit de mettre les cellules nous mm dans un milieu avec des hormones et hop!

Non??

Dans le même style... Quand on a un système de vecteur binaire, ok on a un petit vecteur facile à manipuler avec les bordures et le gène d intéret, mais on ajoute un autre vecteur qd mm avec les gènes vir??? ou alors on ajoute juste le petit vecteur, et comme la bactérie a déjà son propre vecteur c'est bon?

Pour la première partie je suis d'accord avec Deniz, quand on fait une plante transgénique, ton but est d'avoir une plante avec le caractère d'intérêt. Donc tu manipule une seule cellule que tu fera dévelloper dans un milieu adéquat après. Donc pour moi t'as pas besoin des gènes pour faire de l'auxine et de la cyto. Si tu les mettais toutes les cellules issues de ta cellule modifié serai en croissance constante
Pour les vecteurs binaires, aucune idée!

J'ai envoyé un mail à Verbru et à première vue plus besoin des gènes oncogéniques, car on peut faire ca nous même comme le dit justement Deniz (mais bon je trouve ca idiot dans la mesure où on peut le faire faire direct par la plante, on chope le ptit cal formé, on ne prend que les cellules ayant le gène de sélection et puis on régénère notre ptite plante).

Pour le reste voila le mail qu'elle m'a envoyé:

"Comme je l'ai expliqué au cours, les souches d'Agrobacterium
tumefaciens utilisées en laboratoire pour transformer les plantes
contiennent un plasmide Ti modifié. Les gènes du T-DNA ont été
supprimés (donc plus de gènes oncogènes ou de gènes de synthèse
d'opines) - les bordures ont été maintenues car elles sont
indispensables à la fabrication d'un T-DNA (voir aussi dans le cours
le système binaire)

Le but final est de pouvoir modifier génétiquement une plante par
transformation génétique et de regénerer ou produire une plante et pas
un cal.
Dans les étapes de regeneration d'une plante à partir d'une cellule
transformée, on passe par un stade cal ,obtenu en ajoutant de grandes
concentrations d'auxine et CK dans le milieu. "

Moi je pige pas à quoi ca sert de garder les bord du Ti vu que notre petit plasmide contient déjà tout ce qu'on veut et qu'en plus les protéines du plasmide Ti font le même boulot sur notre petit plasmide. Fin bref si quelqu'un a pigé l'ABC de la transgenèse par Agrobactérium, il sait ou venir l'expliquer.

les bords du Ti c'est les seules parties essentielles pour le transport du transgène dans la plante, ils sont reconnus spécifiquement par certaines protéines qui vont les cliver et ensuite s'associer à l'extrémité 5'

c'est donc obligatoire de garder ces séquences de bordure, sans elle il n'y aura pas de transgène


je sais pas si c'était ça que tu voulais =)

Ca je suis totalement OK avec toi Ben, mais ce qui me chipote c'est comment en gros on fait pour faire un transfert? On peut fabriquer un petit plasmide contenant nos deux bords + le transgène en grand quantité à l'aide d'une banque génomique. Ce petit plasmide on va le placer dans notre Agrobactérium dont le plasmide Ti a été modifier (on enlève tout ce qu'il y a à l'intérieur des bornes). Donc moi je vois pas à quoi ca sert de garder ces bornes sur le plasmide Ti modifié étant donné qu'elles sont présentes dans notre petit plasmide fabriqué en grande quantité. Les gènes du plasmide Ti seront capables d'extraire la zone transgènes du petit plasmide sans difficulté pour qu'elle pénètre dans la plante.

je suis d'accord avec toi Oli, les bornes ne sont présentes que sur le vecteur de clonage qui contient le T-DNA (donc avec les bornes+ transgène + gène sélection pour les plantes) et les gènes de résistance pour les bactéries.
Le Ti-plasmid ne contient plus que les opérons vir qui font le transfert du T-DNA "en trans"

Ca me rassure! Bedankt